在线观看无码的免费网站丨夫妇交换性三中文字幕丨无码人妻精品一区二区蜜桃网站丨日韩亚洲精品国产第二页丨精品少妇ay一区二区三区

Rosetta(DE3)感受態細胞說明書

Rosetta(DE3) Competent Cell

Rosetta(DE3)感受態細胞

目錄號：YJ0811

保存條件：-80℃保存。

組分說明

               Cat. No.                              YJ0811A

               Size                                   10×100 μl

               Rosetta (DE3) Competent Cell           10×100 μl

               Control DNA pUC19，0.1 ng/μl              10 μl

產品簡介

　　本產品是采用進口Rosetta菌株，經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA

的熱擊轉化。Rosetta菌株是攜帶氯霉素抗性質粒BL21的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的

6種稀有密碼子（ AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）對應的tRNA，提高外源

基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。使用  pUC19質粒檢測，轉化效率可

達10 7

本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

    注意事項

    1．感受態細胞一定要用干冰運輸。感受態細胞應在  -80℃下保存，不可多次凍融和放

       置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

    2．轉化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

    1．取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。

       以下實驗以50 μl感受態細胞為例。

    2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量

       的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

    4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。

    5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，

       倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意：1）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心（4,000 rpm，2分鐘）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

       2）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

       3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。